Действие второго сезона начинается вечером того же дня, в котором остались герои в первой части. Кулыгин рассказывает Рае, почему ему не дали получить сертификат, и о той роковой аварии, из-за которой его обвинили в халатности и лишили лицензии врача.

В то время, как Рая будет переживать из-за пропажи Кости, Арефьева – злиться, а коллеги над этим шутить, на подстанции появятся два новых сотрудника – водитель Камышов, испытывающий к женщинам особую страсть, и фельдшер Лера, которая станет для семьи Ломагина угрозой. В свою очередь Рыков начнёт подозревать возлюбленную во вновь вспыхнувших к бывшему мужу чувствах, а тайны прошлого подвергнут отношения Тани и Ушакова серьёзным испытаниям.

Героям предстоит научиться работать без своего харизматичного руководителя — Ольги Арефьевой, а также продолжать помогать многим людям со своими судьбами и историями. Среди них: молодая орнитолог, которая просит спасти не только её, но и птицу из Красной книги, раввин, едва не погибший от халатного отношения врачей из другой «скорой», охранник парка, решивший спасти отдыхающих от рюкзака с бомбой, и другие пациенты. Кого-то, несмотря на все старания, придётся потерять. Каждая потеря, безусловно, оставит след в душе героев и что-то изменит в них.

Кулыгину и его коллегам предстоит помочь мастеру по изготовлению зеркал, кожа которого приобрела голубой оттенок, сбитому велосипедисту, рыбаку, который заразился редкой болезнью от трофейной рыбы, глухонемому парню, который долго не мог вызвать скорую по телефону, и даже вору, пострадавшему от железной хватки служебной собаки.